Центрифугирование в градиенте плотности

Это – один из методов препаративного центрифугирования. Процедура основана на различных седиментационных свойствах частиц, различающихся плотностью и размерами. Этот метод не предполагает последовательного удаления осадка. При центрифугировании в градиенте плотности происходит сепарация частиц за одну операцию. В зависимости от плотности они располагаются в различных частях пробирки. Для формирования градиентов применяется широкий спектр материалов. Конкретный выбор зависит от того, какие компоненты должны быть разделены. Необходимым аксессуаром современной лаборатории является насос вакуумный.

При центрифугировании образца в градиенте частицы, имеющие более высокую плотность, мигрируют ближе к дну пробирки. Легкие клетки или органеллы поднимаются к поверхности. Скорости осаждения разных частиц сквозь градиент можно измерить. Они характеризуются значениями коэффициента седиментации S. Этот показатель выражается в единицах Сведберга. Чем компактнее частица и чем больше ее масса, тем выше значение коэффициента седиментации. Во время центрифугирования компоненты образца движутся по градиенту в соответствии со своей удельной скоростью осаждения.

Зональное центрифугирование

Метод является одним из видов центрифугирования в градиенте плотности. Частицы разделяются в зависимости от их размера и массы. Они мигрируют через градиент в соответствии с этими свойствами, что позволяет сепарировать компоненты на отдельные зоны или полосы. Извлекаются они из пробирки, как правило, путем простого сбора фракций. Таким способом выделяются многие белки и другие макромолекулы, например, антитела и вирусные частицы. Зональное центрифугирование – динамическая процедура, то есть, в момент ее прекращения компоненты с максимальной плотностью еще не достигают дна пробирки.

Изопикническое центрифугирование

Это второй вид центрифугирования в градиенте плотности. Проба распределяется во всем объеме раствора (например, CsCI). При этой процедуре частицы мигрируют до тех пор, пока не достигнут равновесной точки. В этом месте будет соответствующая им плотность градиента. Как только частицы достигнут равновесия, они больше не будут двигаться, независимо от того, насколько долго будет работать центрифуга. Процедура применяется для сепарации частиц (например, вирусов или рибосом) и молекул, таких как ДНК.

В любой современной лаборатории, помимо высокоскоростной центрифуги, также должны присутствовать шкафы сушильные.